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RIKEN CDB
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Protocols

     
 

Knockout Mouse

 
     
 

1)ターゲティングベクターの構築

 
  01. ノックアウトマウスと設計図 | Download PDF |  
  02. Targeting VectorとControl Vecotrの作成|Download PDF |  
  03. PCRによるHomology Armの増幅|Download PDF |  
  04. PCRによるスクリーニングの条件検討 |Download PDF |  
  05. ランダムインテグレーション検出 |Download PDF |  
  06. ゲノム抽出〜サザン解析 |Download PDF |  
  07. PCRによるGenotypingの条件検討とテールからのPCR |Download PDF |  
  08. サザンに使う制限酵素 |Download PDF |  
  09. PCRによるloxP配列挿入の確認 |Download PDF |  
     
  2) 設計図のPowerPoint  
  01.DT-ApA/LacZ/Neo|Download ppt |  
  02.DT-ApA/Neo|Download ppt |  
  03.DT-ApA/Conditional KO FW|Download ppt |  
     
 

3)Targeting Vector Construction (English)

 
  01. Vector construction protocol|Download PDF |  
     
 

4)References

 
  01. ang is a novel gene expressed in early neuroectoderm, but its null mutant exhibits no obvious phenotype. |Download PDF |  
  02. Homologous recombination at c-fyn locus of mouse embryonic stem cells with diphtheria toxin A fragment gene in negative selection. |Download PDF |  
  03. A novel negative selection for homologous recombinants using diphtheria toxin A fragment gene. |Download PDF |  
  04. A novel ES cell line, TT2, with high germline-differentiating potency. |Download PDF |  
 

05. TT2細胞とマウスの毛色の関係 |Download PDF |

 
     
 

Transgenic Mouse

 
     
 

1)トランスジーン調製

 
  01.注入用DNA溶液調製の手引き |Download PDF |  
  02.よくある質問|Download PDF  
     
 

2)References

 
  Brinster RL, Chen HY, Trumbauer ME, Yagle MK, Palmiter RD.
Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs. Proc. Nail. Acad. Sci. USA 82 4438-4442, July (1985)
 
  Yang XW, Model P, Heintz N.
Homologous recombination based modification in Esherichia coli and germline transmission in transgenic mice of a bacterial artificial chromsome.Nature biotechnology 15 859-865 (1997)
 
  Gong S, Zheng C, Doughty ML, Losos K, Didkovsky N, Schambra UB, Nowak NJ,Joyner A, Leblanc G, Hatten ME, Heintz N.
A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.Nature. 425 917-925. (2003)
 
  Gong S, Yang XW, Li C, Heintz N.
Highly Efficient Modification of Bacterial Artificial Chromosomes (BACs) Using Novel Shuttle Vectors Containing the R6Kgamma Origin of Replication.Genome Research 12 1992-1998 (2002)
 
  Nagy A, Gertsenstein M, Vintersten K and Behringer R. Manipulating of the Mouse Embryo. A Laboratory Manual. 3rd Edition.Cold Spring Harbor Laboratory Press,2003.  
  発生工学実験マニュアル. トランスジェニックマウスの作り方
勝木元也/編 講談社サイエンティフィク
 
     
 

胚操作(準備中)

 
     
     
理化学研究所 ライフサイエンス技術基盤研究センター 生体モデル開発ユニット/生体工学研究チーム
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