Targeting vectorが完成したら相同組み換え体ES細胞のスクリーニングを行います。

1stスクリーニングはlong PCRを用いて96~192個のNeo耐性コロニーに対して行います。

2ndスクリーニングはlong PCRポジティブES細胞についてサザン解析を行います。

ES細胞はTT2(CBAxC57BL/6)とHK3i(C57BL/6)の2種類から選択できます。

TT2: A novel ES cell line, TT2, with high germline-differentiating potency. Yagi T., Tokunaga T., Furuta Y., Nada S., Yoshida M., Tsukada T., Saga Y., Takeda N., Ikawa Y. and Aizawa S. Anal Biochem. 1993 Oct;214(1):70-6

HK3i: Three Inhibitors of FGF Receptor, ERK and GSK3 Establishes Germline-Competent Embryonic Stem Cells of C57BL/6N Mouse Strain with High Efficiency and Stability. Kiyonari H, Kaneko M, Abe S and Aizawa S. Genesis. 2010 May;48(5):317-27